Holy Rood Sarayı'nda salon. Şehrin ayaklanmaları olduğunu söylüyor. Kalabalığın başında ona yabancı olan biri - mumyalar, maskeli, çanlı dansçılar, siyah davlumbazlar - insanları kraliçeye uymamaları için tehdit etti, tahmin etti ve çağırdı. Kraliçe Riccio'nun mahkemesi, insanlar bu vaazları hevesle dinlerken zaman zaman izlediğini de doğrular. Sayfa ayrıca insanların kraliçenin şapeline bağırdığını söyler: “Papacıların yuvası!”, Kraliçenin kocası olan Darnley'nin soytarısı sunağa atladı ve bir vaaz gibi davranmaya başladı ve insanlar ona alaycı beylikler ile cevap verdi. Kraliçe Mary Stuart umutsuzluk içinde. Halkın nefretini hissediyor, çoğu mahkeme onu terk etti; Hıristiyanlığının İskoçya halkının Hıristiyanlığından ne kadar farklı olabileceğini merak ediyor. Riccio derhal isyanlardan sorumlu olanları cezalandıran bir kararname hazırlamayı teklif ediyor. Maria sayfasını dikte eder, sayfa kraliçenin kocası Heinrich Darnley'nin girilip girilmeyeceğini açıklar. Mary tereddüt eder; isyanların kendisinden ilham aldığından şüpheleniyor - sonuçta kalabalığın kralın soytarı tarafından yönetildi. Burada Riccio ona kraliçe olduğunu hatırlatır; o güneş gibidir ve Tanrı'dan cezalandırma hakkına sahiptir. Kraliçe'nin kararnamesini duyurmak için derhal görev memurunu aramayı talep eder. Douglas girer. Maria ona kağıdı Kraliyet Şansölyesi Morton'a götürmesini söyler, böylece damgası olur. Douglas kararnameyi tarar ve kralın adına sahip olmadığını görür. Kraliçeye bunu sorar. Riccio onun sorumlusu. Douglas öfkesini kaybediyor. Kraliçeye kanlı baskılama önlemleri uygulamamasını tavsiye eder, bunu Fransız veya İtalyan etkisi olarak gördüğünü ima eder. Ancak kraliçe, iradesine itaatsiz denekleri ortadan kaldırma gücünü ona soğuk bir şekilde hatırlatır. Riccio ve Douglas arasında bir kavga patlar, Douglas Riccio'yu bir düelloya davet eder ve yarın Venedik'i öldüreceğine yemin eder. Kraliçe Riccio'dan ayrılır ve götürür. Douglas yalnız kaldı, bir düello düşünüyor. Morton girer. Douglas ona kararnameyi gösterir. Morton kararsız: hem kralın hem de kraliçenin gazabından korkuyor. Damgalamadan Morton kralı teklif eder. Şu anda, Henry, kraliçenin İskoçya'da gerçek bir güce sahip olduğu gerçeğini anlatan şakacı Nick ile bir konuşma yaptı ve Henry sadece kocası, kraliçenin yakınları seçti, örneğin bu İtalyan harper Riccio ... Şu anda Morton talihsiz bir karar getirir. Kral öfkeyle Riccio'yu öldürmeye karar verir. Kral Lindsay mahkemeye girer, kralı yeni edinilen şahinle avlanmaya çağırır. Morton, kralın bugün zaten bir mesleği olduğunu söylüyor. Lindsay, Riccio'ya karşı komploya isteyerek katılır. Bu gece Riccio'yu öldürmeyi gerçekten yasaklıyor, çünkü yarın sabah onu öldürmesi gerekiyor. Sonra Henry, gecikmeden faydalanarak, soyluları astrologlara gönderir ve yıldızların yerinin niyetleri için ne olduğunu öğrenir.
Laboratuvarındaki astrolog (aynı zamanda bir simyacıdır) kendisiyle, deneyimin bilimin yararsızlığını, bu amaç, yıldızların iradesinin insana hükmettiğini, iyiliği ve kötülüğü bertaraf ettiğini doğruladığını savunuyor. Nick içeri girer, witticism serpilir, astrolog zekâdan daha aşağı değildir. Nick, kralın kendisine Riccio’nun kaderini sormasını gönderdiğini ve astroloğa Riccio’nun ölümünü tahmin etmesini söylediğini bildirdi. Astrolog, yıldızların insanlara değil, ona söyleyeceğini söyler ve karşılığında soytarının ölümünü tahmin eder. Bununla ayrılır. Astrologun neden olduğu kraliçe sayfası belirir. Sayfa metresini seviyor. Astrolog ona kraliçeye bugün sevdiği adamın öleceğini söylemesini söyler. “Botwell bugün nasıl ölecek?” - bir sayfayı haykırıyor. Astrolog şaşkın. Riccio'yu aklında tuttu ve onu bu konuda uyarmak için sayfayı acele ediyor. Yalnız bırakıldığında, astrolog merak ediyor - yıldızlardan Botwell'in kraliçe ile bir şekilde karanlık bir şekilde bağlandığı ortaya çıktı - Mars, Satürn ... Botwell giriyor. Monologundan, beklenmedik bir şekilde kendini bir astrologun evinde bulduğu açıktır. Nereye geldiğini anlayan Botwell, astroloğa ne kadar yaşayacağını sorar. Yaşlı adam üç yıl ve Botwell'in kral olacağını söylüyor. Botwell, intihar etmek istediği bir şişe zehir çıkarır, atmak ister - ve tereddüt eder. Gerçekten de, saray entrikalarının atmosferinde, herhangi bir silah kullanışlı olacaktır. O ayrılıyor.
Sayfa kraliçeye Riccio'nun yakında geleceğini söyler. Kraliçe onu dört gözle bekliyor - Ona göre, sadece ona sadık kaldı. "Ve Botvel?" Sayfa sorar. Botvel kim? - Kraliçe ilgileniyor. Sürpriz bir sayfa, Mary'ye botla giderken, kraliçenin başından bir gülün nasıl koptuğunu, bir çiçeğin suya nasıl düştüğünü söyler. Ve sonra saraylardan biri - Botvel - tekneye koştu ve korkutucu bir şekilde sudan bir gül yakalamak için kürekçiyi kovaladı. Hikayeyi dinledikten sonra Mary dua etmek için bir sayfa gönderir. Tanrı'ya, Botwell'e olan sevgisine direnecek daha fazla gücü olmadığını itiraf eder. Kraliçe mahkemede Riccio'ya aşık olduğunu bilir. Riccio giriyor. Meryem onu tehdit eden ölümcül bir tehlike rapor eder ve soğuk bir şekilde ona veda eder ve onu Roma'ya götürecek gemiye işaret eder. Çaresizlik içinde Riccio, ayrılma kararını iptal etmek için kraliçeye yalvarmaya çalışır. Kraliçe kararlı.
Heinrich, Morton ve Lindsay, Riccio’nun yaklaşmakta olan kalkışını öğrendiler ve aceleyle onu öldürmek ya da yelken açmasına izin verdiler. Sonra Douglas belirir ve Riccio'nun zaten yelken açtığını bildirir. Douglas umutsuzluk içinde, kanlı intikam istiyor, şövalye onuruna zarar veriyor. Aniden kraliçeye Riccio'dan bir not getiren bir sayfa ile tanışırlar - ayrılmadı ve akşam onunla birlikte olacak. Komplocular notu alırlar.
Maria odasında nakış yapmakla meşgul. Gelen Riccio, sabah gidemediği için ayrılmayacağını açıklıyor, çünkü Douglas'la bir düello var. Aşkı olmadan hayata ihtiyacı olmadığını itiraf ediyor. Mary'den ona bir gül çelengi vermesini ister - Roma'daki sunağın üzerine çiçek diker ... Henry, Douglas ve Dindsay içeri girip Riccio'yu öldürür. Kraliçe bayılır. Douglas utanç ve dehşete kapıldı - gönüllü olarak sürgüne çekildi. Kraliçe ondan nefret ederse Henry endişelenir. Lindsay, kralı alıp yaklaşan av hakkında fısıldayarak götürür. Kraliçe Botwell, Kraliçe tarafından davet edilir. Mary duyularına gelir, Botvel'i görür ve sevgisini ona itiraf eder. Botvel onu Henry'nin ölümünü istediğini itiraf etmeye zorlar ve bunun bir uyku hapı olduğunu söyleyerek ona zehir şişesi verir. Mary krala bu "ilacı" verir, ama zehir soytarı içir. Ancak, hiçbir şey katil entrikaları durduramaz - Botwell Kral Henry'nin evini havaya uçurur. Uzaktan kalabalığın büyüyen çığlıkları duyuluyor. Kraliçe ile birlikte botvel saklanıyor.